酵母双杂交（Yeast Two-Hybrid, Y2H）是一种用于检测蛋白质-蛋白质相互作用的实验技术。其原理主要基于以下步骤和概念：
转录因子的结构
酵母双杂交技术利用真核生物的转录因子，如GAL4、GCN4等，这些转录因子包含两个不同的结构域：DNA结合结构域（DNA Binding Domain, DBD）和转录激活结构域（Transcription Activation Domain, AD）。
DBD负责识别DNA上的特异序列，而AD则负责激活基因的转录。
蛋白质融合
在实验中，感兴趣的蛋白质A和蛋白质B分别与DBD和AD融合，形成两个融合蛋白：DBD-A（诱饵）和AD-B（猎物）。
如果蛋白质A和蛋白质B在细胞内相互作用，它们将使得DBD和AD接近，从而形成一个具有转录激活功能的功能性转录因子。
报告基因的表达
报告基因（如HIS3、LEU和lacZ等）的表达被用作检测蛋白质相互作用的指标。
当融合蛋白之间存在相互作用时，它们将激活报告基因的转录和表达，从而可以通过观察报告基因的活性来推断蛋白质之间的相互作用。
实验操作
构建诱饵和猎物质粒：将已知或假设作为互作一方的蛋白质X编码序列插入含有BD的酵母表达载体中，使X蛋白与GAL4 BD融合；将另一方蛋白质Y或一组候选蛋白分别将其编码序列插入带有AD的酵母表达载体中，使Y蛋白与GAL4 AD融合，形成BD-X和AD-Y两个重组质粒。
酵母细胞的共转化：将含有BD-X和AD-Y的质粒共转化到酵母细胞中，通过选择性筛选培养基筛选出阳性克隆，即报告基因表达阳性的细胞。
通过以上步骤，酵母双杂交技术能够有效地检测和分析蛋白质之间的相互作用，为研究蛋白质功能、调控以及疾病机制提供了重要工具。