石蜡切片制作步骤如下:
取材
选择合适和新鲜的组织样本。
迅速取材并放入固定液中,以防止组织变化和腐败。
取出所需组织并修整成适当大小的小块。
固定
将组织块浸入固定液(如4%多聚甲醛)中,固定时间根据组织大小而定,通常为6-48小时。
固定液的量建议为不少于组织自身体积的十倍,以确保固定效果。
洗涤与脱水
将固定后的组织块用流水冲洗,去除残留的固定液。
通过一系列浓度递增的酒精(从50%至100%)进行脱水,每步约30分钟至1小时。
透明
将脱水后的组织块浸泡在透明剂(如二甲苯)中,以清除酒精。
透明化过程可能需要多次更换透明剂,以确保组织完全透明。
浸蜡与包埋
将组织块置于熔化的石蜡和二甲苯的混合液中浸蜡,通常需要1小时。
将浸蜡后的组织块放入包埋盒中,倒入熔化的石蜡,冷却后形成石蜡块。
切片
调整切片机厚度设定,一般为3-5微米。
将蜡块夹在固定装置上,使用切片刀切成薄片,并放置在水浴中展片。
贴片与烤片
将展平后的切片放置在恒温水浴锅中,温度控制在37-40℃,使切片展开。
将贴好的切片置于60℃恒温箱内干燥2小时,使蛋白质凝固。
脱蜡及水化
将干燥后的切片置于二甲苯中进行脱蜡,然后依次使用从高浓度到低浓度的酒精进行水化。
染色
使用经典的苏木精和伊红染色,使细胞核染成紫蓝色,细胞质及非细胞成分染成粉红色。
脱水、透明和封片
最后再次进行脱水、透明处理,然后盖上盖玻片,完成石蜡切片的制作。
这些步骤完成后,石蜡切片就可以用于显微镜观察和后续的实验分析。