革兰氏染色法是一种在细菌学中广泛使用的鉴别染色方法,它基于细菌细胞壁的化学性质差异,将细菌分为革兰氏阳性菌(Gram Positive, G+)和革兰氏阴性菌(Gram Negative, G-)两大类。
实验原理:
结晶紫初染和碘液媒染 :细菌首先用结晶紫染色液染色,然后加入碘液作为媒染剂。结晶紫与碘液在细菌细胞内结合形成不溶于水的复合物。脱色:
革兰氏阳性菌的细胞壁较厚,肽聚糖网层次多且交联致密,乙醇或丙酮脱色处理时,因失水使网孔缩小,且不含类脂,因此结晶紫与碘的复合物被保留在细胞壁内,仍呈紫色。而革兰氏阴性菌的细胞壁较薄,外膜层类脂含量高,肽聚糖层薄且交联度差,乙醇脱色后,类脂层迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,使细胞退成无色。
复染:
无色细胞经沙黄等红色染料复染后,革兰氏阴性菌呈现红色,而革兰氏阳性菌仍保留最初的紫色。
染色步骤
1. 固定涂片并滴加结晶紫染液染色1分钟。
2. 水洗去除多余染料。
3. 加入碘液媒染1分钟。
4. 水洗去除多余染料。
5. 加95%乙醇脱色20-30秒。
6. 水洗去除多余乙醇。
7. 加红色染料复染10秒。
8. 干燥后进行镜检。
通过这一系列步骤,革兰氏染色法能够有效地将细菌分为两类,帮助研究者根据细菌的细胞壁结构进行初步的分类和鉴别。